Mi a célja a ddNTP-k használatának?
Mi a célja a ddNTP-k használatának?

Videó: Mi a célja a ddNTP-k használatának?

Videó: Mi a célja a ddNTP-k használatának?
Videó: Мезороллер для лица. Как правильно использовать в домашних условиях. 2024, November
Anonim

DdNTP utal rá Didezoxinukleotidok trifoszfátok, amelyeket a Sanger dideoxi-módszerben használnak különböző hosszúságú DNS-szálak előállítására DNS-szekvenáláshoz. Ez a DNS polimerizációs (vagy DNS elongációs) folyamatának leállását eredményezi, mivel ennek a folyamatnak egy 3'-OH csoportra van szüksége a folytatáshoz.

Ezért miért használnak ddNTP-ket a szekvenálás során?

Didezoxinukleotidok a DNS polimeráz lánchosszabbító inhibitorai, használt a Sanger-módszerben a DNS-re szekvenálás . A didezoxiribonukleotidok nem tartalmaznak 3'-hidroxilcsoportot, ezért nem fordulhat elő további lánc megnyúlás, ha ez a didezoxinukleotid a láncon van. Ez a DNS megszűnéséhez vezethet sorrend.

Hasonlóképpen, a ddNTP-k csatlakoznak a dNTP-ekhez? Egy vagy több a dNTP-k radioaktív jelöléssel vannak ellátva, hogy segítsék a replikációs termékek megjelenítését. Végül minden cső kap egyet a négy speciális nukleotid közül didezoxinukleotidok ( ddNTP-k ). Ha azonban beépült, a DNS-polimeráz nem tudja tovább kiterjeszteni a láncot, mert szüksége van egy 3'-OH-ra csatolni a következő nukleotidra.

Hasonlóképpen feltehetjük a kérdést, hogyan állítják meg a ddNTP-k a szekvenálási reakciót?

Ha kis mennyiségben van jelen reakciók szekvenálása , didezoxiribonukleozid-trifoszfátok ( ddNTP-k ) szüntesse meg a szekvenálási reakció a növekvő DNS-szálak különböző pozícióiban. A ddNTP-k leállítják a szekvenálási reakciót mert ezek: a DNS-polimeráz leesését okozzák a templátszálról. c.

Milyen didezoxinukleotidokat tartalmazó technika használható?

A Sanger szekvenálás a módszer DNS-szekvenálás, amely a láncvégződés szelektív beépítésén alapul didezoxinukleotidok DNS-polimeráz által az in vitro DNS-replikáció során. Frederick Sanger és munkatársai 1977-ben fejlesztették ki, és ez volt a legszélesebb körben használt szekvenálás módszer körülbelül 40 évig.

Ajánlott: