Tartalomjegyzék:

Hogyan lehet gént beilleszteni a plazmidba?
Hogyan lehet gént beilleszteni a plazmidba?

Videó: Hogyan lehet gént beilleszteni a plazmidba?

Videó: Hogyan lehet gént beilleszteni a plazmidba?
Videó: 30 глупых вопросов Agile-коучу [Карьера в IT] 2024, November
Anonim

Az alapvető lépések a következők:

  1. Vágja fel a plazmid és "illessze be" a gén . Ez a folyamat restrikciós enzimeken (amelyek levágják a DNS-t) és DNS-ligázon (amely a DNS-hez kapcsolódik) támaszkodik.
  2. Beszúrás az plazmidot baktériumok.
  3. Nőj fel sokat plazmid -baktériumokat hordozó, és "gyárként" használja őket a fehérje előállításához.

Továbbá, hogyan lehet egy gént beilleszteni a GCSE plazmidba?

ez plazmidba inszertálva ligáz enzimek segítségével. az plazmid megy - ba egy bakteriális sejt. a transzgénikus baktérium szaporodik, ami azt eredményezi ban ben milliónyi azonos baktérium, amelyek emberi inzulint termelnek.

Továbbá, hogyan lehet szubklónozni egy gént? Alapvető lépések a Szubklónozás Felszabadítja és megtisztítja az inszertet a szülővektortól, ezt az inszertet ligálja egy előkészített célvektorba, és ezt a ligációs reakciót kompetens baktériumsejtekké alakítja. Ezután átszűri a transzformált cellákat a beillesztéshez.

Ha ezt szem előtt tartjuk, mi a génklónozás 4 lépése?

A klasszikus restrikciós enzimes emésztési és ligációs klónozási protokollokban bármely DNS-fragmens klónozása alapvetően négy lépésből áll:

  • a kérdéses DNS (vagy cél DNS) izolálása,
  • lekötés,
  • transzfekció (vagy transzformáció), és.
  • szűrési/kiválasztási eljárás.

Hogyan amplifikálsz egy plazmidot?

Kísérleti eljárás

  1. Futtassa le a PCR-t és tisztítsa meg a PCR-terméket: Futtasson PCR-t az inszert DNS-ének amplifikálásához.
  2. Emészd meg a DNS-edet:
  3. Az inszert és a vektor izolálása géltisztítással:
  4. Ligassa be a beszúrást a vektorba:
  5. Átalakítás:
  6. A kész plazmid izolálása:
  7. Ellenőrizze plazmidját szekvenálás segítségével:

Ajánlott: