Tartalomjegyzék:

Hogyan válassz klónokat?
Hogyan válassz klónokat?

Videó: Hogyan válassz klónokat?

Videó: Hogyan válassz klónokat?
Videó: 📘 1 ok, hogy miért olvass 2024, November
Anonim

Amikor választva a klón , győződjön meg arról, hogy a gyökerek erősek, fehérek és lelkesen kilógnak a táptalajból. Ha a gyökerek barnák és összezsugorodtak, vagy más módon inaktívnak tűnnek, tegye vissza, és keressen jobbat.

Különben is, hogyan lehet egyetlen sejtet klónozni?

  1. Számolja meg a sejteket, hogy körülbelül 16 000 sejtet tegyen egy 96 lyukú lemez első üregébe (A1), amely 200 µl táptalajt tartalmaz.
  2. Távolítson el 100 µL-t az A1-et tartalmazó sejtekből, és keverje össze a B1-gyel, háromszor fel-le pipettázva, hogy jól elkeveredjen, mielőtt eltávolítana 100 µL-t és összekeverné a C1-gyel stb.

Illetve hogyan válasszunk emlős sejtkolóniát? Helyezze a lemezt a mikroszkóp alá a differenciálatlan egészséges kiválasztásához kolóniák . Válassz kolóniákat 10 ul-re beállított P-20 pipettával. Gondosan szed a kolónia feltörése nélkül a kolónia szinglibe sejteket és helyezzük át egy 96 lyukú lemezre tripszinnel. Pipettázzon fel és le néhányszor, hogy eloszlassa a kolónia.

Ennek megfelelően hogyan kell használni a klónhengert?

Használata steril közepes csipesz, vegye fel a klónozó henger . Finoman nyomja meg a lapos alját henger a sima szilikonzsírba, és hirtelen függőleges mozdulattal távolítsa el. Ha megfelelően csinálja, akkor egyenletesen oszlik el a zsír az alján henger . Állítsa be a henger kolónia felett.

Hogyan válasszunk telepeket a stabil sejtvonalak számára?

A stabil sejtvonalak generálására szolgáló protokoll több lépést igényel, az alábbiak szerint:

  1. Az optimális szelekciós antibiotikum-koncentráció meghatározásához készítsen elpusztító görbét.
  2. A sejteket transzfektálja a kívánt plazmidkonstrukció(k)kal
  3. Válassza ki és bővítse ki a stabil poliklonális kolóniákat.
  4. Azonosítson egyedi klónokat korlátozott hígítással és kiterjesztéssel.

Ajánlott: