Mi történik, ha túl sok restrikciós enzimet ad hozzá?
Mi történik, ha túl sok restrikciós enzimet ad hozzá?

Videó: Mi történik, ha túl sok restrikciós enzimet ad hozzá?

Videó: Mi történik, ha túl sok restrikciós enzimet ad hozzá?
Videó: Putin LNR va DNR mustaqilligini tan olishga hozirlanyapti...mi? 2024, November
Anonim

Előfordulhat hiányos emésztés amikor túl sok vagy is kis enzim használt. Az szennyeződések jelenléte benne az DNS minta tud gátolják az enzimek , ami szintén hiányos emésztést eredményez. Néhány restrikciós enzimek kofaktorokat igényel a teljes aktivitáshoz.

Különben is, miért adják hozzá utoljára a restrikciós enzimeket?

Az restrikciós enzim általában az utolsó összetevő tette hozzá reakcióra, hogy ne legyen kitéve szélsőséges körülményeknek. Az összeállított reakciót ezután össze kell keverni enzim kiegészítés. Keverje össze az összes oldatot, amely tartalmaz restrikciós enzimek óvatosan elkerülni enzim inaktiválás.

Továbbá hogyan javítható a restrikciós enzimek emésztése? Ne használjon többet az ajánlottnál enzim mennyiségben (pl. 10 egység enzim mikrogramm DNS-enként). Csökkentse a mennyiségét enzim a reakcióban, ha szükséges. Kerülje el a hosszan tartó inkubációt emésztés reakció. Használja az ajánlott reakciópuffert.

Tudja azt is, hogy egy restrikciós enzim miért nem vág?

A hasítandó DNS előkészítése kellene nem tartalmazhat olyan szennyeződéseket, mint a fenol, kloroform, alkohol, EDTA, detergensek vagy túlzott sók, amelyek mindegyike zavarhatja restrikciós enzim tevékenység. Ha inhibitor (gyakran só, EDTA vagy fenol) van jelen, a kontroll DNS megteszi nem vágott keverés után.

Miért okozhat csillagaktivitást az enzim mennyisége?

A sztártevékenység az a korlátozás specifitásának enyhítése vagy megváltoztatása enzim a DNS közvetített hasítása, amely tud olyan reakciókörülmények között fordulnak elő, amelyek jelentősen eltérnek a számára optimálisaktól enzim . Csillag tevékenység lehet Mg jelenléte miatt történik2+, mint van látható például a HindIII-ban.

Ajánlott: